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鏈霉親和素-吖啶酯的制備方法有哪些

2025-02-25 [20]

鏈霉親和素-吖啶酯的制備方法主要有以下幾種:

直接偶聯(lián)法

  • 原理:利用鏈霉親和素與吖啶酯之間的化學(xué)反應(yīng),將兩者直接連接在一起。

  • 操作步驟

    • 吖啶酯的活化:將吖啶酯溶解在適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑中,加入活化劑,如N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)等,在一定條件下反應(yīng),使吖啶酯的羧基活化,以便與鏈霉親和素的氨基結(jié)合。

    • 偶聯(lián)反應(yīng):將活化后的吖啶酯溶液與鏈霉親和素溶液混合,在適宜的緩沖液中,控制反應(yīng)溫度和時(shí)間,使吖啶酯與鏈霉親和素發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后,通過透析、離心等方法去除未反應(yīng)的試劑和雜質(zhì),得到鏈霉親和素-吖啶酯復(fù)合物。

間接偶聯(lián)法

  • 原理:通過一個(gè)中間連接分子,將鏈霉親和素和吖啶酯連接起來。

  • 操作步驟

    • 中間連接分子的選擇與活化:選擇合適的中間連接分子,如雙功能交聯(lián)劑,一端可以與鏈霉親和素的氨基結(jié)合,另一端可以與吖啶酯的羧基結(jié)合。將中間連接分子溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲?,加入活化劑進(jìn)行活化。

    • 與鏈霉親和素的偶聯(lián):將活化后的中間連接分子溶液與鏈霉親和素溶液混合,在一定條件下反應(yīng),使中間連接分子與鏈霉親和素結(jié)合。

    • 與吖啶酯的偶聯(lián):將上述反應(yīng)產(chǎn)物與吖啶酯溶液混合,在適宜的條件下進(jìn)行反應(yīng),使吖啶酯與中間連接分子的另一端結(jié)合,從而形成鏈霉親和素-吖啶酯復(fù)合物。最后,通過純化步驟去除未反應(yīng)的物質(zhì)。

基于磁珠的制備方法

  • 原理:利用磁珠表面的特定官能團(tuán),先將鏈霉親和素固定在磁珠上,再與吖啶酯進(jìn)行偶聯(lián)。

  • 操作步驟

    • 磁珠的選擇與處理:選擇表面帶有羧基或Tosyl官能團(tuán)的磁珠,將其分散在適當(dāng)?shù)木彌_液中,加入活化劑,如EDC等,對(duì)磁珠表面的官能團(tuán)進(jìn)行活化。

    • 鏈霉親和素的固定:將鏈霉親和素溶液加入到活化后的磁珠溶液中,在一定條件下反應(yīng),使鏈霉親和素固定在磁珠表面。

    • 吖啶酯的偶聯(lián):將固定有鏈霉親和素的磁珠與吖啶酯溶液混合,在適宜的條件下進(jìn)行反應(yīng),使吖啶酯與鏈霉親和素結(jié)合。反應(yīng)結(jié)束后,通過磁性分離等方法收集磁珠,并用緩沖液洗滌,去除未結(jié)合的物質(zhì),得到鏈霉親和素-吖啶酯-磁珠復(fù)合物。

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