地塞米松-過氧化物酶標(biāo)記物的合成方法有哪些


地塞米松-過氧化物酶標(biāo)記物的合成方法主要有以下幾種:
戊二醛法
原理:戊二醛是一種雙功能交聯(lián)劑,能與地塞米松和過氧化物酶上的氨基等活性基團(tuán)反應(yīng),形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵,從而將兩者連接起來。
步驟:將地塞米松和過氧化物酶溶解在合適的緩沖液中,調(diào)節(jié)pH值至適宜范圍,一般為7.0-8.0。然后緩慢加入戊二醛溶液,使其終濃度達(dá)到一定比例,通常為0.1%-0.5%。在室溫或特定溫度下攪拌反應(yīng)一段時(shí)間,一般為1-2小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后,通過透析、凝膠過濾等方法去除未反應(yīng)的戊二醛和其他小分子雜質(zhì),得到地塞米松-過氧化物酶標(biāo)記物。
碳二亞胺法
原理:碳二亞胺類試劑可活化地塞米松分子上的羧基,使其與過氧化物酶分子上的氨基發(fā)生縮合反應(yīng),形成酰胺鍵,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)兩者的偶聯(lián)。
步驟:將地塞米松和過氧化物酶分別溶解在相應(yīng)的緩沖液中,加入碳二亞胺類試劑,如EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽),使其終濃度為0.1-0.5mol/L。調(diào)節(jié)pH值至4.0-6.0,在室溫下攪拌反應(yīng)數(shù)小時(shí)。反應(yīng)完成后,通過透析、離心等方法進(jìn)行純化,得到標(biāo)記物。
混合酸酐法
原理:先將地塞米松的羧基與氯甲酸異丁酯等試劑反應(yīng)生成混合酸酐,再與過氧化物酶的氨基反應(yīng),形成共價(jià)連接。
步驟:將地塞米松溶解在有機(jī)溶劑中,加入氯甲酸異丁酯和三乙胺,在低溫下反應(yīng)生成混合酸酐。然后將過氧化物酶溶液加入其中,在室溫下攪拌反應(yīng)一段時(shí)間。最后通過透析、層析等方法分離純化標(biāo)記物。
過碘酸鈉氧化法
原理:過碘酸鈉可將過氧化物酶分子上的糖基氧化為醛基,醛基再與地塞米松分子上的氨基發(fā)生反應(yīng),形成席夫堿,從而實(shí)現(xiàn)標(biāo)記。
步驟:將過氧化物酶用過碘酸鈉溶液在一定條件下進(jìn)行氧化反應(yīng),生成含醛基的過氧化物酶。然后將地塞米松與氧化后的過氧化物酶在適宜的pH值和溫度下反應(yīng),形成席夫堿。最后用硼氫化*等還原劑將席夫堿還原為穩(wěn)定的共價(jià)鍵,再進(jìn)行純化。
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